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Técnicas

Bioquímica

  • Separación de lipoproteínas por ultracentrifugación secuencial (Kontron).
  • Determinación de biomarcadores sanguíneos para autoanalizador (Cobas Mira Plus): perfil lipídico, proteínas ...
  • Determinación de α-tocoferol y retinol por HPLC (Hewlett Packard, 1050 con detector de UV / visible y fluorescencia).
  • Cuantificación de aldehídos apolares por HPLC (Hewlett Packard, 1050 con detector de UV / visible y fluorescencia).
  • Cuantificación de aldehídos totales por TLC.
  • Determinación de la susceptibilidad a la oxidación de las lipoproteínas por espectrofotometría (Uvikon 922, Kontron).
  • ELISAs: TNF-a, FABP4, ApoH, E-selectina, VCAM-1, ICAM-1, ox-LDL, Ab-oxLDL ...

Cultivos celulares

  • Optimización y mantenimiento de cultivos primarios y líneas celulares establecidas.
  • Cultivos primarios: fibroblastos, monocitos, HUVEC, haec, VSMC ...
  • Líneas celulares: THP-1, HEPG2, Jurka, 3T3L1 ...
  • Congelación y descongelación de células.
  • Almacenamiento de células en nitrógeno líquido.
  • Recuento de células con cámara de Neubauer (microscopio Olympus invertido y de contraste de fases).
  • Determinación de la viabilidad celular con Trypan blue, LDH, Hoechst.
  • Detección de micoplasmas en cultivos celulares por PCR.
  • Tinciones celulares específicas: Oil Red, ORO ...
  • Ensayo de adhesión celular.

Biologia celular

  • Obtención de extractos de proteínas nucleares celulares.
  • Obtención de lisats celulares.
  • Determinación de proteínas por Lowry, Bradford.
  • Separación de proteínas por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE ...) y tinción con nitrato de plata, Coomassie blue (Protean II, BioRad; X Cell SureLock Mini Cell, Invitrogen; Multiphor II System, Amersham Biosciences; Hoefer SE 260 , Amersham Bioscience).
  • Determinación de proteínas por western blot: XCell Blot Module (Invitrogen) Trans-Blot SD Semi-Dry Transfer Cell (BioRad).
  • Inmunoprecipitación.

Biologia molecular

  • Aislamiento de RNA total a partir de tejidos y células.
  • Síntesis de cDNA. Transcripción inversa (RT).
  • Arrays de expresión génica (en colaboración con empresa externa).
  • Amplificación de ADN por PCR.
  • Electroforesis en geles de poliacrilamida y tinción con nitrato de plata, Sybr-Safe.
  • Electroforesis en geles de agarosa y tinción con Sybr-Safe.
  • Electromobiliy shift assay (EMSA).
  • Clonación de promotores en vectores.
  • Mutagénesis dirigida.
  • Transfeccions celulares.
  • Ensayo de la luciferasa.

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